发明创造名称：各种成分比例稳定均一的大黄总蒽醌及其组合物用于治疗胆囊炎
外观设计名称：
决定号：181126
决定日：2019-06-17
委内编号：1F256020
优先权日：
申请（专利）号：201410503241.8
申请日：2014-09-28
复审请求人：江西百神药业股份有限公司
无效请求人：
授权公告日：
审定公告日：
专利权人：
主审员：郭洁
合议组组长：田洪旸
参审员：李莹
国际分类号：A61K36/708，A61P1/16，G01N30/90，G01N30/88
外观设计分类号：
法律依据：专利法第22条第3款
决定要点
：评价一项发明是否具备创造性时，应将其与最接近的现有技术进行比较以确定区别技术特征和发明实际解决的技术问题，然后考察现有技术整体上是否给出了将上述区别技术特征应用到该最接近的现有技术以解决其存在的技术问题的启示，如果现有技术中存在这种启示，并且所获得的发明的技术效果是可以预料的，则该发明不具备创造性。
全文：
本复审请求涉及申请号为201410503241.8，名称为“各种成分比例稳定均一的大黄总蒽醌及其组合物用于治疗胆囊炎”的发明专利申请。申请人为江西百神药业股份有限公司。本申请的申请日为2014年09月28日，公开日为2014年12月24日。
经实质审查，国家知识产权局原审查部门于2018年03月29日发出驳回决定，驳回了本发明专利申请，其理由是：权利要求1-4不具备专利法第22条第3款规定的创造性。驳回决定所依据的文本为：申请日2014年09月28日提交的说明书第1-98段（即第1-10页）、说明书摘要；2017年08月04日提交的权利要求第1-4项（即第1-4页）。
驳回决定所针对的权利要求书如下：
“1. 一种大黄总蒽醌的检测方法，其特征在于：
【性状】为褐黄色粉末，气微，味微苦，
【鉴别】方法如下：取大黄总蒽醌0.1g，加三氯甲烷40ml超声处理l0分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸对照品，加甲醇溶解，分别制成每1ml含0.2mg、0.1mg，0.1mg，0.1mg，0.2mg的溶液作为对照溶液，照薄层层析法试验，吸取上述两种供试品和对照品溶液各5～10μl分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚30～60℃一甲酸乙酯一甲酸以体积比为15:5:1在10℃以下放置的上层溶液为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，
【检查】方法如下：
没食子酸的检查：取大黄总蒽醌细粉25mg，置5ml量瓶中，加甲醇4～5ml超声处理30分钟使溶解，冷却，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:4:1甲苯—乙酸乙酯—甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点颜色应不得深于对照品斑点的颜色，
土大黄苷的检查：取大黄总蒽醌0.2g，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10ul点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯365nm下检视，不得显持久的亮紫色荧光，
【含量测定】方法如下：
(1)、总蒽醌
对照品溶液的制备
取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml置l0ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，
测定法：取大黄总蒽醌约40mg，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，加8％盐酸溶液20ml，再加三氯甲烷20mL置沸水浴中加热回流1小时，冷却，置分液 漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器至无色，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再分别用20ml、15ml、10ml三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷提取液置100ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取0.4ml置10ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法，在510nm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中总蒽醌的量，计算，即得，
(2)、游离蒽醌
对照品溶液的制备
取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml置l0ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，
测定法：取大黄总蒽醌约40ml，精密称定，置100ml锥形瓶中，加三氯甲烷约60ml在功率250W，频率25KHz下超声处理40分钟，放冷，滤过，用三氯甲烷冲洗滤器及锥形瓶，并入滤液中，滤液转移至100ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取0.4ml置l0ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液lOml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法，在510nm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中游离蒽醌的量，计算，即得，
(3)、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量：照高效液相色谱法测定，
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液按体积比为85:15为流动相，检测波长为440nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000，
对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10μg、大黄素甲醚20μg、大黄酚50μg的混合溶液，即得，
供试品溶液的制备：取大黄总蒽醌约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入甲醇适量，在功率250W，频率25KHz下超声处理30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，剩余滤液备用，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液20ml再加三氯甲烷20ml加热回流2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液， 减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得，
(4)游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚总量照高效液相色谱法测定，
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液按体积比为85:15为流动相，检测波长为440nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000，
对照品溶液的制备：取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10μg、大黄素甲醚20μg、大黄酚50μg的混合溶液，即得，
供试品溶液的制备：取大黄总蒽醌约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入甲醇适量，在功率250W，频率25KHz下超声处理30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液的一部分作为供试品溶液，
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其中所述大黄总蒽醌包括任何一种方法制备的大黄蒽醌物质，包括游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等或它们的混合物。
3. 根据权利要求1或2所述的检测方法，其中所述大黄总蒽醌是采用以下方法制备的大黄总蒽醌：
步骤1，
取大黄1000g，照中国药典2010年版一部附录I0流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每公斤药粉每分钟1～1.5ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液5000ml备用；继续渗漉，收集续漉液10000ml减压回收乙醇至60℃相对密度为0.90，放冷，静置，滤过，得析出物I，滤液l备用；
步骤2，
取初漉液加50％乙醇稀释至含醇量75％，用10％氢氧化钠的65％乙醇溶液碱化至漉液中无没食子酸斑点，静置12小时，取上清液用盐酸调节pH值至6.0～7.0，减压回收乙醇至60℃相对密度1.00～1.02，放冷，静置，滤过，得沉淀物l和滤液2，
步骤3，
滤液2与滤液l合并，减压浓缩至80℃相对密度1.40～1.45，加6倍稠膏重量的乙醇回流2次，每次0.5小时，滤过，滤液用10％氢氧化钠的65％乙醇溶 液碱化至溶液中无没食子酸斑点，静置12小时，滤过，滤液调节pH值至6.0～7.0，减压回收乙醇，浓缩至80℃相对密度为1.45～1.48，并与上述沉淀物1合并，称定重量，加入10倍量0.5％氢氧化钠水溶液溶解，浓盐酸调节pH值至6.0～7.0，加入0.2倍合并物重量的明胶，加热，浓缩至80℃相对密度为1.40～1.45，趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀加入适量沸水，加热使溶解，使80℃相对密度为1.40～1.45，趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀再重复操作1次，合并3次滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度0.95～0.97，放冷，滤过，收集析出物II和滤液3，
步骤4，
滤液3检查鞣质至阴性，加4倍量乙醇沉淀除尽残留明胶，滤过，回收乙醇，蒸干，85℃，0.07MPa减压干燥，粉碎，加6倍干固物重量乙醇回流2次，每次0.5小时，合并乙醇液，减压回收乙醇，得残留物，
步骤5，
残留物与析出物I、析出物II合并，混匀，65℃以下减压干燥，即得。
4. 根据权利要求3所述的检测方法，其中所述大黄总蒽醌含总蒽醌以大黄素计，为50％-60％，含游离蒽醌以大黄素计，为48％-58％，按干燥品计算，含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的总量不少于50％，按干燥品计算，含游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚的总量不少于40％。”
驳回决定认为：对比文件3（“大黄不同方式醇沉产物品质评价”，孙玉琦等，《中药材》，第33卷，第10期，第1642-1644页，公开日为2010年10月31日）公开了使用紫外-可见分光光度计测定大黄总蒽醌提取物中总蒽醌和游离蒽醌含量的方法。权利要求1与对比文件3的区别在于：权利要求1中还有性状的描述、其他指标成分的鉴别与检测方法，实际解决的技术问题是提供一种更为全面的大黄总蒽醌的检测方法。然而对比文件4（《中华人民共和国药典（2010年版第一增补本）》，国家药典委员会编，中国医药科技出版社，第1版，第77-78页，公开日为2012年08月31日）公开了大黄的鉴别方法，在此基础上，本领域技术人员可参考相同的方法来鉴别大黄总蒽醌，芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸是大黄素总蒽醌中的主要活性物质，因此不难想到使用上述物质作为对照品。对比文件4还公开了用高效液相色谱法分别测定总蒽醌（即芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量）和游离总蒽醌（即游离的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量）的方法，以及没食子酸的鉴别方法。至于供试品和对照品溶液的配制方法，标准曲线的绘制方法是本领域的常规技术手段，部分具体操作步骤的不同也是可以根据实际情况进行常规调整的。各检测步骤中物质用量、操作参数的选择是本领域技术人员通过常规实验手段容易确定的。因此，在对比文件3的基础上结合对比文件4以及本领域普通技术知识得到权利要求1的技术方案是显而易见的，权利要求1不具备创造性。从属权利要求2-4直接或间接引用权利要求1，本领域技术人员通过适当选择常规的中药提取方法容易获得含有权利要求2所述成分及其混合物的大黄总蒽醌提取物，在对比文件2（CN101401851A，公开日2009年04月08日）公开制备方法基础上对制备流浸膏的标准、各步骤操作条件进行常规选择即可得到权利要求3、4所述大黄总蒽醌制备方法，因此权利要求2-4也不具备创造性。
申请人江西百神药业股份有限公司（下称复审请求人）对上述驳回决定不服，于2018年07月13日向国家知识产权局提出了复审请求，但未修改申请文件。复审请求人认为：①对比文件3公开的加水10mL溶解，至100mL烧瓶中，超声，加入三氯甲烷15mL，移到分液漏斗中的技术方案为游离蒽醌供试品溶液的制备方法；本申请涉及的是一种大黄总蒽醌的检测方法。检测对象不同，属于不同的发明构思。对比文件3总蒽醌供试品的提取溶剂为8%盐酸和三氯甲烷的混合溶剂，盐酸溶液可溶解水溶性杂质，提高分离效果，本领域技术人员不会想到仅用三氯甲烷提取。②对比文件3采用分光光度法检测大黄总蒽醌时检测波长510nm，对比文件4高效液相检测大黄总蒽醌时，波长254nm。本申请与对比文件3相比，检测对象为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚，检测波长为510nm。采用检测方法和检测对象均不同，不存在启示。③本申请的检测方法和制得的大黄总蒽醌纯度较高，具有显著进步。
经形式审查合格，国家知识产权局于2018年07月24日依法受理了该复审请求，并将其转送至原审查部门进行前置审查。
原审查部门在前置审查意见书中认为：根据公知的大黄中蒽醌类化合物类型和主要化合物（“实验八 大黄中游离蒽醌的提取、分离和鉴定”，梁敬钰主编，《天然药物化学实验与指导（第二版）》，中国医药科技出版社，第85-86页第三节基本原理、第89页表2-10，公开日2010年09月30日），从对比文件3所检测的游离蒽醌样品、总蒽醌含量测定样品中得到本申请所待测物质的含量并不需要付出创造性劳动，检测对象并非完全不同。对比文件4公开了大黄的质量标准，同样主要用于检测大黄总蒽醌中的主要活性物质。对于检测波长，对比文件3公开了选择510 nm为检测波长，这与本申请采用的440nm同样属于可见光波长380-780nm的范围内。由于检测的是多种化合物，在可见光范围内波动属于正常现象，检测的效果并不会超出本领域技术人员的合理预期。对比文件4采用的高效液相色谱法，与可见分光光度计检测机理不同，波长不同是显而易见的。因而坚持原驳回决定。
随后，国家知识产权局成立合议组对本案进行审理。
合议组于2019年01月16日向复审请求人发出复审通知书，指出：对比文件3公开了紫外可见分光光度法测定大黄总蒽醌和游离蒽醌含量的方法。权利要求1与对比文件3的区别技术特征在于：（1）紫外可见分光光度法测定大黄总蒽醌和游离蒽醌含量的方法中部分参数和步骤不同或进行了具体限定，限定了具体的对照品溶液和标准曲线制备方法；（2）含量测定检测方法还包括高效液相色谱法测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量，高效液相色谱法测定游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚；（3）检测方法还包括性状、鉴别、检查项。基于上述区别技术特征，实际解决的技术问题是提供一种更全面的大黄总蒽醌的检测方法。然而（1）对比文件3已经公开了采用大黄素为对照品，以及使用标准曲线计算，权利要求1所述对照品溶液和标准曲线制备方法均是本领域常规方法。对于样品以及溶剂的具体用量，本领域技术人员能够根据实际需要通过常规实验手段进行调整或确定。对于游离蒽醌供试品的制备，本领域公知的大黄中的游离蒽醌不溶于水，可溶于有机溶剂。因此本领域技术人员能够根据实际需要以及提取物的纯度，采用三氯甲烷直接溶解，而不采用水溶解后三氯甲烷萃取的方法，并相应的调整供试品制备步骤。（2）对比文件4已经公开了高效液相色谱法测定大黄总蒽醌和游离蒽醌的方法，根据公知的大黄总蒽醌和游离蒽醌的主要成分，本领域技术人员能够在此基础上选择合适的对照品。对比文件3公开了游离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌均可在510nm下做含量检测，从而给出了在可见光范围内选择合适波长的教导。本领域技术人员能够在此教导下通过常规实验筛选确定检测波长为440nm。而在检测方法整体一致的情况下，对具体样品、溶剂用量浓度进行调整，选择超声促进溶解并确定具体参数是本领域技术人员通过常规实验手段即可做出的调整和选择。（3）对于大黄总蒽醌的性状，本领域技术人员只需要对产品进行常规观察和品尝即可知晓。对于“鉴别”项，大黄总蒽醌为大黄中主要化学成分，对比文件4公开了蒽醌类化合物大黄酸为对照品鉴别大黄的方法，因此本领域技术人员可以想到采用相同方法来鉴别大黄总蒽醌，相应的省去用大黄药材作为对照品的步骤。根据公知的大黄总蒽醌中的主要成分，以及对比文件4高效液相检测总蒽醌含量方法中也采用了芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，因而本领域技术人员容易想到将这五个化合物均作为对照品鉴别大黄总蒽醌。对于“检查”项，对比文件4公开了土大黄苷检测方法。本领域还公知的，没食子酸和大黄蒽醌同样可作为大黄中的主要化学物质进行检测，本领域技术人员能够想到也选择没食子酸为大黄蒽醌提取物的检测项，将对比文件4所述没食子酸检测方法用于检测大黄蒽醌中的没食子酸。至于所述大黄总蒽醌供试品制备方法，是常规的供试品制备工艺。因此，在对比文件3的基础上结合对比文件4以及本领域普通技术知识得到权利要求1的技术方案是显而易见的，权利要求1不具备创造性。从属权利要求2-4直接或间接引用权利要求1；本领域技术人员已知大黄主要化学成分种类且有能力选取常规方法制备大黄蒽醌物质；在对比文件2公开制备方法基础上对制备流浸膏的标准、各步骤操作条件进行常规选择，用常规手段测量各化合物含量，即可得到权利要求3、4所述大黄总蒽醌制备方法；因此权利要求2-4也不具备创造性。
针对复审请求人提出复审请求时陈述的意见，合议组认为：①本申请和对比文件3同样对总蒽醌和游离蒽醌进行了紫外分光光度法的含量测定，检测对象相同，并且使用了同样的溶剂溶解供试品。至于请求人所述仅采用三氯甲烷作为提取溶剂的大黄总蒽醌检测方法，实际是权利要求1“鉴别”项的内容。而对比文件4在鉴别部分公开了“残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液”，根据该提取方法，可知所述残渣为含大黄总蒽醌的提取物。②对比文件3公开了游离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌均可在510nm下做含量检测，给出了在可见光范围内选择合适波长的教导。而本申请检测的亦是已知的大黄蒽醌中的主要化合物，本领域技术人员通过常规实验即可筛选确定检测波长为440nm。③对于检测项而言，本申请是将对比文件3、4的大黄检测项以及常规的检测项进行了简单组合。对于大黄总蒽醌而言，对比文件2步骤1-3所得的大黄总蒽醌提取物与本申请所述大黄总蒽醌无法区分，即认为对比文件2已经公开了本申请所述大黄总蒽醌，至于其中总蒽醌、游离蒽醌以及各化合物的含量，通过常规测量手段即可测得。
复审请求人于2019年02月28日提交了意见陈述书，仍未修改申请文件。复审请求人认为：根据对比文件3中第2.3.2节记载，对比文件3采用提取溶剂8%盐酸和三氯甲烷的比例与本申请不同，属于不同提取溶剂；文献“姜丽江，聚氯乙烯薄膜有害助剂和单体对食品的屋檐研究.2010年.浙江工商大学硕士论文，图5-3”显示不同配比的提取溶剂会影响提取效果；因此本领域技术人员基于对比文件3，不能想到调整提取溶剂配比。对比文件3公开了游离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌均可在510nm下做含量检测；不同物质对应的最大吸收波长不同，选择合适的检测波长是影响检测效果的关键，本领域技术人员不会想到调整检测波长为440nm。本申请权利要求1提供了一种由性状、鉴别、检查和含量测定组成的检测方法，所述检测方法分别针对本申请说明书记载的大黄总蒽醌成分，权利要求1具有显著的进步。
在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。
二、决定的理由
1、审查文本的认定
复审请求人在复审程序中未修改申请文件，因此，本复审请求审查决定所针对的文本与驳回决定所针对的审查文本相同，即：申请日2014年09月28日提交的说明书第1-98段（即第1-10页）、说明书摘要；2017年08月04日提交的权利要求第1-4项（即第1-4页）。
2、专利法第22条第3款
专利法第22条第3款规定，创造性，是指与现有技术相比，该发明具有突出的实质性特点和显著的进步。
根据该规定，评价一项发明是否具备创造性时，应将其与最接近的现有技术进行比较以确定区别技术特征和发明实际解决的技术问题，然后考察现有技术整体上是否给出了将上述区别技术特征应用到该最接近的现有技术以解决其存在的技术问题的启示，如果现有技术中存在这种启示，并且所获得的发明的技术效果是可以预料的，则该发明不具备创造性。
针对本案，权利要求1要求保护一种大黄总蒽醌的检测方法。对比文件3公开了大黄醇沉产物的品质评价方法。其中具体公开了：大黄醇沉产物蒽醌类成分含量测定方法：游离蒽醌供试品溶液的制备，称取干燥后提取物约50mg，精密称定，加水10mL溶解，至100mL烧瓶中，超声，加入三氯甲烷15mL，移到分液漏斗中，少量三氯甲烷洗涤烧瓶，分取三氯甲烷层，再加三氯甲烷萃取3次，每次10mL，合并萃取液，挥去三氯甲烷，0.8%醋酸镁甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，得游离蒽醌含量测定样品。总蒽醌、结合蒽醌供试品溶液的制备，称取干燥后提取物约10 mg，精密称定，加8% 盐酸10mL溶解，至100mL烧瓶中，加三氯甲烷15mL，加热回流1 h，放冷，转移至分液漏斗中，少量三氯甲烷洗涤烧瓶，分取三氯甲烷层，再加三氯甲烷萃取2次，合并萃取液，挥去三氯甲烷，0. 8%醋酸镁甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，得总蒽醌含量测定样品。按照2010年版《中华人民共和国药典》一部附录VA紫外可见分光光度法，选择510 nm为检测波长。标准曲线方程为A=0.05543C 0.01221（r=0.9997）。依法测定大黄醇沉产品样品吸光度，计算游离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌的含量。对照品为大黄素（参见1643页右栏2.3节，左栏第3段）。可见对比文件3公开了紫外可见分光光度法测定大黄总蒽醌和游离蒽醌含量的方法。
权利要求1与对比文件3的区别技术特征在于：（1）紫外可见分光光度法测定大黄总蒽醌和游离蒽醌含量的方法中部分参数和步骤不同或进行了具体限定，限定了具体的对照品溶液和标准曲线制备方法；（2）含量测定检测方法还包括高效液相色谱法测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量，高效液相色谱法测定游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚；（3）检测方法还包括性状、鉴别、检查项。基于上述区别技术特征，实际解决的技术问题是提供一种更全面的大黄总蒽醌的检测方法。
对于区别技术特征（1），首先，对比文件3已经公开了采用大黄素为对照品，以及使用标准曲线计算，权利要求1所述对照品溶液和标准曲线制备方法均是本领域常规方法。其次，对于样品以及各试剂的具体用量，本领域技术人员能够根据实际需要通过常规实验手段进行调整或确定。再次，对于游离蒽醌供试品的制备，本领域公知的大黄中的游离蒽醌不溶于水，可溶于有机溶剂（参见《常用骨科中药有效成分》，谢艳等主编，郑州大学出版社，2009年08月第1版，第77页“大黄”）。因此本领域技术人员能够根据实际需要以及提取物的纯度，采用三氯甲烷直接溶解，而不采用水溶解后三氯甲烷萃取的方法，并相应的调整供试品制备步骤。
对于区别技术特征（2），对比文件4公开了大黄总蒽醌高效液相色谱法的含量测定方法。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相，检测波长为254nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lm l含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得（每lm l中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg，含大黄素甲醚8μg）。供试品溶液的制备：取本品粉末（过四号筛）约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10ml，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。游离总蒽醌照高效液相色谱法（附录VI D）测定；色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备、测定法同总蒽醌项下。供试品溶液的制备：取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。（参见78页【含量测定】“总蒽醌”“游离蒽醌”项）。可见对比文件4已经公开了高效液相色谱法测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量，以及游离蒽醌的方法。对比文件4公开了采用芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，而本领域技术人员公知的游离蒽醌中以游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚为主要成分（参见《中药鉴定学》，康廷国主编，中国中医药出版社，2012年07月第3版，第74-75页“成分”）。因此本领域技术人员能够想到选择用游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚为对照品，检测其总量，以检测大黄游离蒽醌总量。对于检测波长，在确定了检测对象、填充剂、流动相后，本领域技术人员有动机重新选择合适的检测波长。而对比文件3公开了游离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌均可在510nm下做含量检测，而本申请亦是检测的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量和游离芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量，上述化合物是大黄蒽醌中的主要化合物，其总量的检测条件类似于总蒽醌或总游离蒽醌的检测条件是本领域技术人员能够想到的，因此对比文件3给出了在可见光范围内选择合适波长的教导，从而通过常规实验筛选确定检测波长为440nm。而在检测方法整体一致的情况下，对具体样品、溶剂用量浓度进行调整，选择超声促进溶解并确定具体参数是本领域技术人员通过常规实验手段即可做出的调整和选择。
对于区别技术特征（3），首先，对于大黄总蒽醌的性状，本领域技术人员只需要对产品进行常规观察和品尝即可知晓。
其次，对于“鉴别”项，对比文件4还公开了大黄的鉴别方法为：取本品粉末0.1g，加甲醇20ml，浸泡1小时，滤过，取滤液5ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次震摇提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光等（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色（参见77页最后一段至78页第1段）。大黄总蒽醌为大黄中主要化学成分，并且对比文件4也采用了蒽醌类化合物大黄酸为对照品鉴别大黄，因此本领域技术人员可以想到采用相同方法来鉴别大黄总蒽醌，相应的省去用大黄药材作为对照品步骤。并且芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚是大黄总蒽醌中的主要成分，对比文件4高效液相检测总蒽醌含量方法中也采用了芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，因而本领域技术人员容易想到将这五个化合物均作为对照品鉴别大黄总蒽醌。
再次，对于“检查”项，对比文件4公开了土大黄苷检查：取本品粉末0.2g，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10μl，点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫色荧光（参见78页第2段）。即公开了权利要求1所述的土大黄苷检测方法。本领域还公知的，没食子酸和大黄蒽醌同样可作为大黄中的主要化学物质进行检测（（参见《常用骨科中药有效成分》，谢艳等主编，郑州大学出版社，2009年08月第1版，第84页“没食子酸的测定”））。本领域技术人员能够想到也选择没食子酸为大黄蒽醌提取物的检测项。对比文件4公开了金果饮咽喉片中没食子酸的检测方法：取没食子酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（参见827页【鉴别】第（2）项）。基于上述理由，本领域技术人员有动机将对比文件4所述没食子酸检测方法用于检测大黄蒽醌中的没食子酸。至于所述大黄总蒽醌供试品制备方法，是常规的供试品制备工艺。综上所述，在对比文件3的基础上结合对比文件4以及本领域普通技术知识，得到权利要求1的技术方案，对本领域技术人员而言是显而易见的，权利要求1没有突出的实质性特点和显著的进步，不具有专利法第22条第3款规定的创造性。
从属权利要求2进一步限定所述大黄总蒽醌的组成。本领域公知的大黄的主要化学成分包括游离蒽醌、结合蒽醌、双蒽酮类、鞣质、糖等（参见《中药鉴定学》，康廷国主编，中国中医药出版社，2012年07月第3版，第74-75页“成分”），因此本领域技术人员能够想到大黄总蒽醌作为大黄提取物其中不可避免含有上述成分或其混合物。本领域技术人员有能力选取常规方法制备大黄蒽醌物质。因此，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，从属权利要求2也不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
从属权利要求3进一步限定了大黄总蒽醌的制备方法。对比文件2公开了一种以大黄为原料，用溶剂法提取分离大黄总蒽醌的方法：1）粉碎：取大黄块或大黄片，均匀加入粉碎机内，制成大黄粗粉1000g；2）渗漉：取大黄粗粉置于渗漉桶内，加入0.8倍量的95％乙醇，均匀湿润，密闭浸渍48小时；匀速加入95％乙醇渗漉，渗漉速度为每分钟1-1.5ml，缓缓渗漉，收集得初漉液5000ml，备用；收集续滤液10000ml，减压回收乙醇至相对密度0.90～0.91（60～65℃），放冷，静置，滤过，收集得析出物1，另器保存，得滤液1备用；3）碱沉：取初滤液加稀乙醇稀释至含醇量65～75％，用10％氢氧化钠65％乙醇溶液碱化至漉液中无没食子酸斑点，静置12小时，取上清液用盐酸调 pH至6.0～7.0，减压回收乙醇至相对密度1.00～1.02（60～65℃），放冷，静置，滤过，收集得沉淀物1和滤液2，沉淀物1另器保存；滤液2与滤液1合并，减压浓缩至相对密度1.40～1.45（80～85℃），加乙醇回流1～2次，每次0.5小时，滤过，滤液用10％氢氧化钠65％乙醇溶液碱化至滤液中没食子酸检查呈阴性；静置12小时，滤过，滤液调pH至6.0～7.0，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.45～1.48（80～85℃），并与上述沉淀物1合并，称定重量，加入10倍量0.5％氢氧化钠水溶液溶解，浓盐酸调pH至6.0～7.0，加入0.2～0.4倍合并物重量的明胶，加热，浓缩至相对密度为1.40～1.45（80～85℃），缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，沉淀加入适量沸水，加热使溶解，再加乙醇沉淀，滤过，反复操作至醇液色淡，合并滤液，减压回收乙醇至相对密度0.95～0.97（60～65℃），放冷，滤过，收集析出物II，另器保存，滤液检查鞣质应呈阴性，乙醇沉淀除尽残留明胶，滤过，回收乙醇至干，减压干燥（85℃，0.07MPa），粉碎，加乙醇回流1～2次，合并乙醇回流液，减压回收乙醇，得残留物；将残留物与析出物1、析出物2合并，混匀，65℃以下减压干燥，即得；4）析出物与浓缩物的精制……；5）大黄总蒽醌的收集：……（参见说明书第3-5页具体实施方式）。可见对比文件2公开了权利要求3所述的大黄总蒽醌的制备方法，至于析出物与浓缩物的精制，总蒽醌的收集步骤，是对于大黄总蒽醌提取物的进一步除杂精制，本领域技术人员能够根据实际需求选择省去该步骤。对于除明胶后乙醇回流用量，本领域技术人员通过常规实验手段即可确定，且其效果也是可以合理预期的。“中国药典2010年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂”是本领域常用的渗漉法制备流浸膏的标准，所以本领域技术人员容易想到选择上述标准制备大黄总蒽醌的流浸膏。因此，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，从属权利要求3也不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
从属权利要求4进一步限定了大黄总蒽醌的组成，如上所述，对比文件2公开了与本申请近乎一致的制备方法，并且还公开了经精制后大黄总蒽醌提取物中总蒽醌的含量不低于60%（参见对比文件2具体实施方式的步骤4、5）。可见，对比文件2步骤1-3所得的大黄总蒽醌提取物与本申请所述大黄总蒽醌无法区分，即对比文件2已经公开了本申请所述大黄总蒽醌，至于其中总蒽醌、游离蒽醌以及各化合物的含量，通过常规测量手段即可测得。因此，在其引用的权利要求不具备创造性的基础上，从属权利要求4也不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。
3、对复审请求人相关意见的评述
合议组认为：关于8%盐酸和三氯甲烷的溶剂配比，复审请求人所述文献中提取对象和溶剂与本申请完全不同；其考察的是以二氯甲烷和甲醇不同比例混溶为待选提取溶剂比较各溶剂的提取效果，本领域技术人员可知，当极性不同的二氯甲烷和甲醇以不同比例混溶时，所得混合溶剂的极性也会改变，从而对同一物质的提取率也会有所不同。然而对比文件3和本申请采用8%盐酸溶解、再加三氯甲烷加热回流提取的步骤是为了在酸性条件下水解大黄蒽醌，以便后续三氯甲烷萃取提取。可见所述文献无法用以证明，该水解步骤中8%盐酸、三氯甲烷用量配比不同对检测样品的提取有何种影响。对于该水解步骤中试剂8%盐酸、三氯甲烷具体用量，如前所述，本领域技术人员能够根据实际需要通过常规实验手段进行调整或确定，本申请说明书没有证据显示该步骤试剂的用量配比取得了何种预料不到的技术效果。
对于检测波长，在确定了检测对象、填充剂、流动相后，本领域技术人员能够通过常规实验手段筛选确定合适的检测波长。而对比文件3公开了游离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌均可在510nm下使用紫外-可见分光光度计测定做含量检测，其中510nm属于可见光的波长。而本申请高效液相色谱法检测项下检测的是芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量和游离芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量，所列化合物是大黄结合蒽醌和游离蒽醌中的主要化合物。一方面所述化合物总量的检测条件类似于离蒽醌、结合蒽醌、总蒽醌的检测条件也是本领域技术人员能够想到的；另一方面由于检查对象和检查方法的调整，本领域技术人员能够想到适当调整选择合适的检测波长。因此对比文件3给出了在可见光范围内选择合适波长的教导，本领域技术人员通过常规实验即可筛选确定检测波长为440nm。
对于检测项而言，如前所述本申请是将对比文件3、4的大黄检测项以及常规的检测项进行了简单组合。对于大黄总蒽醌而言，如前所述对比文件2步骤1-3所得的大黄总蒽醌提取物与本申请所述大黄总蒽醌无法区分，即认为对比文件2已经公开了本申请所述大黄总蒽醌，至于其中总蒽醌、游离蒽醌以及各化合物的含量，通过常规测量手段即可测得。
综上所述，复审请求人的意见陈述不具有说服力。
基于以上事实和理由，合议组作出如下审查决定。
三、决定
维持国家知识产权局于2018年03月29日对本申请作出的驳回决定。
如对本复审请求审查决定不服，根据专利法第41条第2款的规定，复审请求人可以自收到本决定之日起三个月内向北京知识产权法院起诉。
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