发明创造名称：一种功能性纳米颗粒复合微球及其制备与应用
外观设计名称：
决定号：182001
决定日：2019-06-24
委内编号：1F248372
优先权日：
申请（专利）号：201510471940.3
申请日：2015-08-05
复审请求人：浙江东方基因生物制品股份有限公司 上海交通大学
无效请求人：
授权公告日：
审定公告日：
专利权人：
主审员：徐雪锋
合议组组长：董晓静
参审员：施啸奔
国际分类号：B01J13/02；G01N33/543
外观设计分类号：
法律依据：专利法第22条第3款
决定要点
：如果发明要求保护的技术方案相对于最接近的现有技术存在的区别技术特征既不是公知常识，也不是最接近的现有技术相关的技术手段，并且没有证据证明其在另外一份对比文件中得以披露，那么通常情况下认为现有技术中不存在将该区别技术特征应用到最接近的现有技术以解决其存在的技术问题的启示。
全文：
本复审请求审查决定涉及申请号为201510471940.3，名称为“一种功能性纳米颗粒复合微球及其制备与应用”的发明专利申请（下称本申请）。申请人原为上海交通大学，后变更为浙江东方基因生物制品股份有限公司。本申请的申请日为2015年8月5日，公开日为2015年12月9日。
经实质审查，国家知识产权局原审查部门于2017年12月22日发出驳回决定，驳回了本申请，其理由是：权利要求1-8不具备创造性，不符合专利法第22条第3款的规定。驳回决定所依据的文本为：申请日2015年8月5日提交的说明书第1-62段、说明书摘要、摘要附图、说明书附图；2017年12月1日提交的权利要求第1-8项。驳回决定所针对的权利要求书如下：
“1. 一种功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述功能性纳米颗粒复合微球为功能性纳米颗粒复合PEG微球，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球包含功能性纳米颗粒和含有PEG链段的聚合物，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球的平均粒径为0.1～1000μm，粒径分布变异系数小于10％；
所述功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化物纳米颗粒和半导体纳米颗粒；其中所述量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CuInS2、CuInSe2、CuInS2/ZnS、CuInSe2/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb；
所述PEG链段接枝于下列聚合物中的一种或几种：聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚酰胺、聚丙烯腈、聚碳酸酯、聚己内酯、聚氨酯、壳聚糖、白蛋白、胶原、聚苯乙烯马来酸酐共聚物、聚乙酸乙酯、聚苯乙烯丙烯酸共聚物、聚苯乙烯甲基丙烯酸共聚物或聚苯乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物，聚(苯乙烯-二乙烯基苯-甲基丙烯酸)和马来酸酐-1-十八烯共聚物；所述功能性纳米颗粒复合微球采用成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备获得；其制备方法包括膜乳化-乳液溶剂挥发法。
2. 根据权利要求1所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述PEG链段包括分子量在500～10000Da范围内的PEG或PEG衍生物，所述PEG衍生物包括单功能PEG、均一型双功能PEG、异(基)双功能PEG、多臂PEG、Y型结构PEG、枝状结构PEG或其混合物。
3. 根据权利要求1所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球经表面改性连有官能团；所述表面改性是下列中的一种或几种：水解、化学接枝或磺化；所述官能团是下列中的一种或几种：羧基、氨基、磺酸根基、硝基、羟基、巯基、氯基或酯基。
4. 根据权利要求3所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述官能团上还连接有以下连接物中的一种或几种：N-羟基琥珀亚酰胺、生物素、亲和素和抗生蛋白链菌素。
5. 一种功能性纳米颗粒复合微球的制备方法，所述功能性纳米颗粒复合微球为功能性纳米颗粒复合PEG微球，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球包含功能性纳米 颗粒和含有PEG链段的聚合物，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球的平均粒径为0.1～1000μm，粒径分布变异系数小于10％，所述功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化物纳米颗粒和半导体纳米颗粒；其中所述量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CuInS2、CuInSe2、CuInS2/ZnS、CuInSe2/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb；
所述PEG链段接枝于下列聚合物中的一种或几种：聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚酰胺、聚丙烯腈、聚碳酸酯、聚己内酯、聚氨酯、壳聚糖、白蛋白、胶原、聚苯乙烯马来酸酐共聚物、聚乙酸乙酯、聚苯乙烯丙烯酸共聚物、聚苯乙烯甲基丙烯酸共聚物或聚苯乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物，聚(苯乙烯-二乙烯基苯-甲基丙烯酸)和马来酸酐-1-十八烯共聚物；其特征在于，所述制备方法包括膜乳化-乳液溶剂挥发法；成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球。
6. 根据权利要求1-4任意一项所述的功能性纳米颗粒复合微球在检测样品中一种或多种目标物中的应用。
7. 一种基于功能性纳米颗粒复合微球的生物检测探针，其特征在于，所述生物检测探针包括根据权利要求1-4任意一项所述的功能性纳米颗粒复合PEG微球和偶联在所述功能性纳米颗粒复合PEG微球表面的探针分子；所述探针分子选自下列中的一种或几种：蛋白质、蛋白质片段和核酸。
8. 根据权利要求7所述的生物检测探针在检测样品中一种或多种目标物中的应用。”
驳回决定认为：对比文件1（CN102908961A，公开日为：2013年2月6日）公开了一种功能性纳米颗粒复合非交联微球及其制备方法和应用，权利要求1要求保护的技术方案相比对比文件1公开的内容，区别技术特征在于：（1）本申请限定为功能性纳米颗粒复合PEG微球，包含的聚合物为含有PEG链段的聚合物，而对比文件1公开的功能性纳米颗粒复合微球包含聚合物；（2）采用成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备。基于上述区别技术特征，确定权利要求1的技术方案实际解决的技术问题为如何提高微球的非特异性吸附抑制效果。针对区别技术特征（1），对比文件2（CN101899161A，公开日为2010年12月1日）公开了一种聚乙二醇修饰氧化铁纳米探针的制备方法，其公开了采用PEG链段的聚合物修饰纳米粒子，且在对比文件2中所起的作用与在本申请中的作用相同，都能达到提高非特异性吸附抑制的效果，即对比文件2给出了将上述技术特征用于对比文件1中以解决其技术问题的技术启示。在对比文件1的基础上，为了抑制非特异性吸附，使功能性纳米颗粒复合微球包含含有PEG链段的聚合物以形成功能性纳米颗粒复合PEG微球是本领域技术人员容易做到的，无需付出创造性劳动。针对区别特征（2），在对比文件2公开了采用PEG链段的聚合物修饰纳米粒子的启示下，结合对比文件1公开的包含功能性纳米颗粒和聚合物的功能性纳米颗粒复合微球，采用在成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备是本领域技术人员容易调整的，且属于本领域常用的方式，其技术效果能够预期的。因此权利要求1不具备创造性；基于类似的理由，独立权利要求5-8也不具备创造性；从属权利要求2-4的附加技术特征或被对比文件1和2所公开，或为本领域的公知常识，因此从属权利要求2-4也不具备创造性。
申请人（下称复审请求人）对上述驳回决定不服，于2018年4月8日向国家知识产权局提出了复审请求，同时修改了权利要求书。其中在独立权利要求1和4中进一步限定“所述PEG链段为聚乙二醇单甲醚或端羧基聚乙二醇单甲醚”，并删去原权利要求2。复审请求时新修改的权利要求书如下：
“1. 一种功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述功能性纳米颗粒复合微球为功能性纳米颗粒复合PEG微球，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球包含功能性纳米颗粒和含有PEG链段的聚合物，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球的平均粒径为0.1～1000μm，粒径分布变异系数小于10％；
所述功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化物纳米颗粒和半导体纳米颗粒；其中所述量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CuInS2、CuInSe2、CuInS2/ZnS、CuInSe2/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb；
所述PEG链段接枝于下列聚合物中的一种或几种：聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚酰胺、聚丙烯腈、聚碳酸酯、聚己内酯、聚氨酯、壳聚糖、白蛋白、胶原、聚苯乙烯马来酸酐共聚物、聚乙酸乙酯、聚苯乙烯丙烯酸共聚物、聚苯乙烯甲基丙烯酸共聚物或聚苯乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物，聚(苯乙烯-二乙烯基苯-甲基丙烯酸)和马来酸酐-1-十八烯共聚物；所述功能性纳米颗粒复合微球采用成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备获得；其制备方法包括膜乳化-乳液溶剂挥发法；
所述PEG链段为聚乙二醇单甲醚或端羧基聚乙二醇单甲醚。
2. 根据权利要求1所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球经表面改性连有官能团；所述表面改性是下列中的一种或几种：水解、化学接枝或磺化；所述官能团是下列中的一种或几种：羧基、氨基、磺酸根基、硝基、羟基、巯基、氯基或酯基。
3. 根据权利要求2所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述官能团上还连接有以下连接物中的一种或几种：N-羟基琥珀亚酰胺、生物素、亲和素和抗生蛋白链菌素。
4. 一种功能性纳米颗粒复合微球的制备方法，所述功能性纳米颗粒复合微球为功能性纳米颗粒复合PEG微球，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球包含功能性纳米颗粒和含有PEG链段的聚合物，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球的平均粒径为0.1～1000μm，粒径分布变异系数小于10％，所述功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化 物纳米颗粒和半导体纳米颗粒；其中所述量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CuInS2、CuInSe2、CuInS2/ZnS、CuInSe2/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb；
所述PEG链段接枝于下列聚合物中的一种或几种：聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚酰胺、聚丙烯腈、聚碳酸酯、聚己内酯、聚氨酯、壳聚糖、白蛋白、胶原、聚苯乙烯马来酸酐共聚物、聚乙酸乙酯、聚苯乙烯丙烯酸共聚物、聚苯乙烯甲基丙烯酸共聚物或聚苯乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物，聚(苯乙烯-二乙烯基苯-甲基丙烯酸)和马来酸酐-1-十八烯共聚物；其特征在于，所述制备方法包括膜乳化-乳液溶剂挥发法；成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球；
所述PEG链段为聚乙二醇单甲醚或端羧基聚乙二醇单甲醚。
5. 根据权利要求1-3任意一项所述的功能性纳米颗粒复合微球在检测样品中一种或多种目标物中的应用。
6. 一种基于功能性纳米颗粒复合微球的生物检测探针，其特征在于，所述生物检测探针包括根据权利要求1-3任意一项所述的功能性纳米颗粒复合PEG微球和偶联在所述功能性纳米颗粒复合PEG微球表面的探针分子；所述探针分子选自下列中的一种或几种：蛋白质、蛋白质片段和核酸。
7. 根据权利要求6所述的生物检测探针在检测样品中一种或多种目标物中的应用。”
复审请求人认为：（1）对比文件2采用二氨基聚乙二醇进行修饰，对应被修饰的纳米粒子为特定表面含有丰富羧基的表面粒子，修饰的过程是在氧化铁纳米粒子表面羧基反应生成酰胺键；而本申请应用的PEG嵌段为聚乙二醇单甲醚或端羧基聚乙二醇单甲醚，这两种聚乙二醇链段分别与聚苯乙烯马来酸苷共聚物和聚苯乙烯丙烯酸共聚物反应生成酯键和酸酐键，反应机理不同于对比文件2的酰胺键。（2）对比文件2为氧化铁纳米粒子探针，纳米级别，对比文件2为复合微球探针，探针规模和结构不一样；（3）实施例9提出了一套具体的方法，用PEG微球和非PEG微球分别对甲胚胎蛋白进行高灵敏的定量检测，数据表明PEG委屈探针检测灵敏性高一个数量级，表明其抑制非特异性吸附的效果；（4）对比文件2与本申请的制备方法不同，对比文件2中的氧化铁纳米探针的制备过程是在制备好的氧化铁纳米颗粒表面进一步修饰PEG，本申请是将功能性纳米颗粒包裹在聚合物基体中，纳米颗粒得到很好的保护导致其稳定性非常好。
经形式审查合格，国家知识产权局依法受理了该复审请求，于2018年4月16日发出了复审请求受理通知书，同时将其转送至原审查部门进行前置审查。
原审查部门在前置审查意见书中认为：1、本领域技术人员明了决定非特异性吸附抑制性能的是PEG链段上的PEG，在对比文件2公开了用于提高抗蛋白非特异性吸附能力的PEG链段以及与PEG链段接枝的具有多个羧基的聚合物的基础上，本领域技术人员足以有动机选用或替换能够与其它复合纳米颗粒的聚合物接枝的PEG链段如聚乙二醇单甲醚或端羧基聚乙二醇单甲醚，这是由于聚乙二醇单甲醚的羟基与聚苯乙烯马来酸酐共聚物的酸酐能够形成酯键、端羧基聚乙二醇单甲醚的羧基与聚苯乙烯丙烯酸共聚物的羧基能够形成酸酐键，且采用PEG链段如聚乙二醇单甲醚或端羧基聚乙二醇单甲醚所获得的微球性能或技术效果相比对比文件并未产生更优的效果。2、纳米级、微米级的微球是本领域最常用的微球，且在成像、标记、体外诊断等不同应用领域或不同应用对象时，需用不同粒径范围的微球是本领域技术人员明了的。基于对比文件2公开的内容，本领域技术人员足以有动机在面临如何提高非特异性吸附抑制能力的问题时采用对比文件2的所述手段。将接枝功能链段与没接枝功能链段的微球进行定量检测与对比以说明所产生的效果是常用的检测方法，且本申请定量检测得到非特异性吸附抑制的效果相比对比文件并不是难以预料的。3、1）对比文件2公开了将PEG修饰到聚合物与纳米颗粒复合反应后的微球上且得到的PEG微球具有抑制非特异性吸附的效果。2）不论是成球前在聚合物上接枝PEG链段然后与纳米颗粒复合成球，还是先将聚合物与颗粒复合成球然后在微球表面接枝PEG链段，决定非特异性吸附抑制性能的都是PEG链段上的PEG。3）首先，本申请说明书第9段记载了成球前在聚合物上接枝PEG链段然后与纳米颗粒复合成球，以及先将聚合物与颗粒复合成球然后在微球表面接枝PEG链段的两种方式均可用于制备；本申请实施例4、5、6采用的是成球前聚合物接枝PEG链段然后与纳米颗粒复合成球，实施例7是先将聚合物与颗粒复合成球然后在微球表面接枝PEG链段，这两种方式所获得的复合微球粒径分布变异系数SV并没有明显差异，单分散性都产生了较好的效果。其次，在聚合物上接枝功能性链段后与纳米颗粒复合成球，或者将聚合物与纳米颗粒成球后再在表面接枝，是制备复合微球的两种常用方法，在对比文件2公开了先将聚合物与纳米颗粒复合成球再在微球表面接枝PEG链段的制备方法的基础上，采用在聚合物上接枝PEG链段后再与纳米颗粒复合成球的方式属于本领域的常规替换。再次，对于申请人所述的成球前在聚合物上接枝PEG链段与成球后在微球表面接枝PEG链段两种方式的稳定性差异较大以及条件控制不同，这并非是由在先或在后接枝PEG链段的顺序来决定的，稳定性与纳米颗粒和聚合物之间、聚合物与PEG链段之间的成键密切相关，而对比文件1公开了本申请大部分的纳米颗粒类型以及与纳米颗粒复合的聚合物类型，对比文件2公开有本申请说明书记载的PEG链段类型如氨基封端的PEG。对比文件1公开了制备功能性微球的膜乳化方法，本领域技术人员能够预期本申请的复合微球制备方法能实现大量制备，方便控制粒径，符合各种不同生物医学应用的要求的效果。因而坚持原驳回决定。
随后，国家知识产权局成立合议组对本案进行审理。
合议组于2019 年1 月29 日向复审请求人发出复审通知书，指出：权利要求1-7不具备专利法第22条第3款规定的创造性。
复审请求人于2019 年3 月11 日提交了意见陈述书，同时修改了权利要求书。其中对权利要求1和4中的PEG链段和聚合物做了进一步的限定。新提交的权利要求如下：
“1. 一种功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述功能性纳米颗粒复合微球为功能性纳米颗粒复合PEG微球，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球包含功能性纳米颗粒和含有PEG链段的聚合物，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球的平均粒径为0.1～1000μm，粒径分布变异系数小于10％；
所述功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化物纳米颗粒和半导体纳米颗粒；其中所述量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CuInS2、CuInSe2、CuInS2/ZnS、CuInSe2/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb；
所述PEG链段接枝于聚合物——聚苯乙烯马来酸酐共聚物；所述功能性纳米颗粒复合微球采用成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备获得；其制备方法包括膜乳化-乳液溶剂挥发法；
所述PEG链段为聚乙二醇单甲醚。
2. 根据权利要求1所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球经表面改性连有官能团；所述表面改性是下列中的一种或几种：水解、化学接枝或磺化；所述官能团是下列中的一种或几种：羧基、氨基、磺酸根基、硝基、羟基、巯基、氯基或酯基。
3. 根据权利要求2所述的功能性纳米颗粒复合微球，其特征在于，所述官能团上还连接有以下连接物中的一种或几种：N-羟基琥珀亚酰胺、生物素、亲和素和抗生蛋白链菌素。
4. 一种功能性纳米颗粒复合微球的制备方法，所述功能性纳米颗粒复合微球为功能性纳米颗粒复合PEG微球，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球包含功能性纳米颗粒和含有PEG链段的聚合物，所述功能性纳米颗粒复合PEG微球的平均粒径为0.1～1000μm，粒径分布变异系数小于10％，所述功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化物纳米颗粒和半导体纳米颗粒；其中所述量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CuInS2、 CuInSe2、CuInS2/ZnS、CuInSe2/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb；
所述PEG链段接枝于聚合物——聚苯乙烯马来酸酐共聚物；其特征在于，所述制备方法包括膜乳化-乳液溶剂挥发法；成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球；
所述PEG链段为聚乙二醇单甲醚。
5. 根据权利要求1-3任意一项所述的功能性纳米颗粒复合微球在检测样品中一种或多种目标物中的应用。
6. 一种基于功能性纳米颗粒复合微球的生物检测探针，其特征在于，所述生物检测探针包括根据权利要求1-3任意一项所述的功能性纳米颗粒复合PEG微球和偶联在所述功能性纳米颗粒复合PEG微球表面的探针分子；所述探针分子选自下列中的一种或几种：蛋白质、蛋白质片段和核酸。
7. 根据权利要求6所述的生物检测探针在检测样品中一种或多种目标物中的应用。”
复审请求人认为：对比文件2和本申请实施例7中采用的先成球再接枝的方式存在以下问题：接枝时需要使用昂贵的PEG衍生物和昂贵的偶联试剂如1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（EDC）（1g，约800元），N-羟基琥珀酰亚胺（s-NHS）（0.25g,约1500元）等。由于先成球再接枝需要保证先成的微球结构不被破坏，因此无法采用价格便宜的PEG，比如聚乙二醇单甲醚。因为聚乙二醇单甲醚上的羟基的反应活性比氨基要低很多，若需要其上的羟基与微球上的羧基反应，那么一般要在强极性环境中反应，这样就会破坏事先形成的微球结构。而且成球后，微球容易团聚在一起，即分散度不佳。而保证一定的分散度，才能使得每个微球表面修饰的PEG的量大致相同。为保证一定的分散度，只能牺牲对量的要求，故目前先成球再接枝仅只限于实验室制备阶段，难以工业化生产，且很难保证批次之间的接枝效果稳定性。
而本次修改后的权利要求1采用的先接枝再成球的方式相较于先成球再接枝具有以下优点：接枝时使用的聚乙二醇单甲醚非常便宜，无需EDC或s-NHS，成本低廉。本申请采用成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球，更简单、快速，见本申请实施例1和4，用时为12h多一点，且不需要昂贵的PEG衍生物，实施例1中采用聚苯乙烯马来酸酐共聚物（PSMA）和分子量为1000的聚乙二醇单甲醚（mPEG1000）先行接枝。PSMA在高温下（100℃），其马来酸苷官能团会打开产生2个羧基与mPEG1000上的羟基反应，完成接枝。然后再与纳米颗粒形成功能微球。由于接枝后才形成微球，使得在接枝过程中不存在微球团聚现象，因此一次可合成大量的接枝聚合物，从而可一次制备大量的微球，而且批次间稳定性好。
在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。
二、决定的理由
（一）关于审查文本
本复审请求审查决定所针对的审查文本为：申请日2015年8月5日提交的说明书第1-62段，说明书摘要、摘要附图、说明书附图；2019年3月11日提交的权利要求第1-7项。
（二）关于专利法第22条第3款
专利法第22条第3款规定，创造性，是指与现有技术相比，该发明具有突出的实质性特点和显著的进步。
如果发明要求保护的技术方案相对于最接近的现有技术存在的区别技术特征既不是公知常识，也不是最接近的现有技术相关的技术手段，并且没有证据证明其在另外一份对比文件中得以披露，那么通常情况下认为现有技术中不存在将该区别技术特征应用到最接近的现有技术以解决其存在的技术问题的启示。
对比文件1公开了一种功能性纳米颗粒复合非交联微球及其制备方法和应用，并具体公开了如下内容（参见说明书第0019-0044段）：一种功能性纳米颗粒复合非交联微球粉末，包含功能性纳米颗粒复合非交联微球，功能性纳米颗粒复合非交联微球包含功能性纳米颗粒和聚合物，平均粒径为0.1-20μm，粒径分布变异系数≤9.1%。所述的功能性纳米颗粒是下列中的一种或几种：量子点、磁性纳米颗粒、荧光纳米颗粒、金属纳米颗粒、金属氧化物纳米颗粒或半导体纳米颗粒。所述的量子点是下列中的一种或几种：CdS、HgS、CdSe、CdTe、ZnSe、HgSe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InCaAs、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdS/ZnS、Cd/Ag2S、CdS/Cd(OH)2、CdTe/ZnS、CdTe/CdS、CdSe/ZnSe、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CuSe、CdSeTe、CdSeTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS，以及掺杂量子点CdS:Mn、CdS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb。所述的聚合物是下列中的一种或几种：聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚酰胺、聚丙烯腈、聚碳酸酯、聚己内酯、聚氨酯、聚乳酸、壳聚糖、白蛋白、胶原、聚苯乙烯-马来酸酐共聚物、聚乙酸乙酯、聚苯乙烯-丙烯酸共聚物、聚苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物或聚苯乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物。所述的功能性纳米颗粒复合非交联微球经表面改性连有官能团。所述的表面改性是下列中的一种或几种：水解、化学接枝或磺化。所述的官能团是下列中的一种或几种：羧基、氨基、磺酸根基、硝基、羟基、氯基或酯基。所述的官能团上还连接有以下连接物中的一种或几种：N-羟基琥珀酰亚胺、生物素、亲和素或抗生蛋白链菌素。
对比文件2公开了（参见说明书第0003-0012段）：一种聚乙二醇修饰氧化铁纳米探针的制备方法，该方法包括如下步骤：利用具有多个羧基的聚合物与氧化铁纳米粒子反应，向氧化铁纳米粒子表面引入丰富的羧基；利用氧化铁纳米粒子表面的羧基与二胺基聚乙二醇在1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺催化下反应，通过羧基与二胺基聚乙二醇一端的胺基反应，制备胺基聚乙二醇修饰的氧化铁纳米探针。有益效果：将聚乙二醇高密度的修饰到氧化铁纳米粒子表面，以使氧化铁纳米粒子具有较好的抗蛋白非特异性吸附能力，能够有效的富集到肿瘤部位。
1、关于权利要求1
权利要求1请求保护一种功能性纳米颗粒复合微球。权利要求1要求保护的技术方案相比对比文件1公开的内容，区别技术特征在于：（1）权利要求1限定了聚合物为聚苯乙烯马来酸酐；PEG链段为聚乙二醇单甲醚。（2）采用成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备。
基于上述区别技术特征，驳回决定和复审请求书均认为权利要求1相对于对比文件1实际解决的计划苏问题是如何提高微球的非特异性吸附抑制效果，对此合议组予以确认。
驳回决定、前置审查意见通知书以及复审通知书中，对于区别技术特征（2）不能带来创造性的相关理由可以概括为：（1）在对比文件2公开采用PEG链段的聚合物修饰纳米粒子的启示下，结合对比文件1公开的包含功能性纳米颗粒和聚合物的功能性纳米颗粒复合微球，采用在成球前在聚合物上接枝PEG链段，然后与纳米颗粒复合成球的方式制备是本领域技术人员容易调整的，且属于本领域常用的方式，其技术效果能够预期的。（2）首先，本申请记载了成球前在聚合物上接枝PEG链段然后与纳米颗粒复合成球，以及先将聚合物与颗粒复合成球然后在微球表面接枝PEG链段的两种方式均可用于制备；本申请实施例4-6采用的是成球前聚合物接枝PEG链段然后与纳米颗粒复合成球，实施例7是先将聚合物与颗粒复合成球然后在微球表面接枝PEG链段，这两种方式所获得的复合微球粒径分布变异系数SV并没有明显差异，单分散性都产生了较好的效果。其次，在聚合物上接枝功能性链段后与纳米颗粒复合成球，或者将聚合物与纳米颗粒成球后再在表面接枝，是制备复合微球的两种常用方法，在对比文件2公开了先将聚合物与纳米颗粒复合成球再在微球表面接枝PEG链段的制备方法的基础上，采用在聚合物上接枝PEG链段后再与纳米颗粒复合成球的方式属于本领域的常规替换。再次，成球前在聚合物上接枝PEG链段与成球后在微球表面接枝PEG链段两种方式的稳定性差异较大以及条件控制不同，这并非是由在先或在后接枝PEG链段的顺序来决定的，稳定性与纳米颗粒和聚合物之间、聚合物与PEG链段之间的成键密切相关，而对比文件1公开了本申请大部分的纳米颗粒类型以及与纳米颗粒复合的聚合物类型，对比文件2公开有本申请说明书记载的PEG链段类型如氨基封端的PEG。对比文件1公开了制备功能性微球的膜乳化方法，本领域技术人员能够预期本申请的复合微球制备方法能实现大量制备，方便控制粒径，符合各种不同生物医学应用的要求的效果。
对此，合议组认为，判断创造性的关键在于判断本领域技术人员在现有技术的基础上能否显而易见用区别技术特征来改进最接近的现有技术，从而解决所要解决的技术问题。首先，“本申请记载了成球前在聚合物上接枝PEG链段然后与纳米颗粒复合成球，以及先将聚合物与颗粒复合成球然后在微球表面接枝PEG链段的两种方式均可用于制备”以及“实施例4-6与实施例7效果没有明显差异”的事实，不能说明在本申请的申请日之前已经存在“成球前在聚合物上接枝PEG链段、然后与纳米颗粒复合成球的方式”的制备方法，也就不能证明本领域技术人员能够基于现有技术显而易见采用该手段来改进对比文件1。
其次，基于当前证据，也不能支持该区别技术特征（2）（即采用成球前在聚合物上接枝PEG链段、然后与纳米颗粒复合成球的方式制备）“属于本领域常用的方式”，也不足以说明“在聚合物上接枝功能性链段后与纳米颗粒复合成球，或者将聚合物与纳米颗粒成球后再在表面接枝，是制备复合微球的两种常用方法”，因为对比文件1和2均未公开采用成球前在聚合物上接枝PEG链段、然后与纳米颗粒复合成球的方式制备复合微球，也没有证据表明其为公知常识。而且，权利要求进一步限定了接枝时采用了价格便宜的聚乙二醇单甲醚，对比文件1和2以及现有技术中均未给出聚乙二醇单甲醚可以用在成球后聚合物上接枝PEG链段的启示。
补充说明的是，前置审查意见通知书认为成球前接枝PEG链段和成球后接枝PEG链段的方式产生的微球粒径分布变异系数SV并没有明显差异、单分散性都产生了较好的效果，然而比较本申请的实施例7与4-6，可以得知，实施例7得到的微球的颗粒变异分布系数明显小于实施例4-6获得微球。而且基于当前证据，也不能完全否认“成球前在聚合物上接枝PEG链段与成球后在微球表面接枝PEG链段两种方式的稳定性差异较大以及条件控制不同”与“在先或在后接枝PEG链段的顺序”无关，因此前置审查意见的相关认定也缺少证据支持。
综上可知，基于当前的证据，尚不足以得出本领域技术人员显而易见会用区别技术特征（2）来改进对比文件1从而得到权利要求1所要保护技术方案的结论，驳回决定和复审通知书中涉及权利要求1及其从属权利要求2-3相对于对比文件1和对比文件2以及公知常识的结合不具备创造性的理由不能成立。权利要求5和6引用了权利要求1-3，因此驳回决定和复审通知书中涉及权利要求5和6及其从属权利要求7相对于对比文件1和对比文件2以及公知常识的结合不具备创造性的理由也不能成立。
基于类似的理由，驳回决定和复审通知书中涉及权利要求4相对于对比文件1和对比文件2以及公知常识的结合不具备创造性的理由不能成立。
根据上述事实和理由，合议组作出如下复审请求审查决定。
三、决定
撤销国家知识产权局于2017 年12 月22 日对本申请作出的驳回决定。由国家知识产权局原审查部门在本复审请求审查决定所针对的文本基础上对本申请继续进行审查。
如对本复审请求审查决定不服,根据专利法第41条第2款的规定,请求人自收到本决定之日起三个月内向北京知识产权法院起诉。
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